미생물 순수 배양

미생물 순수 배양이란

멸균된 배지에

키우고자 하는 미생물을 접종하여

접종한 미생물만 자라도록 하는 것으로

보통 미생물 배양이라 합니다. 

목적으로 하는 미생물을 배양하기 위해서는 목적하는 미생물 외에 다른 미생물이 섞여 있으면 안 됩니다.  

배지 자체도 다른 미생물에 의해 오염되어 있어도 안 되겠지요! 

따라서 미생물 순수 배양이란 외부로부터의 오염을 완전히 차단한 상태에서의 배양을 말합니다.  

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(7-2 미생물 배양)

 

7-2-4 미생물 순수 배양

 

이론적으로 생육환경이 지속적으로 조절해주면 미생물은 무한 반복적으로 증식하지만, 일반적인 배양기내에서 미생물이 생육하게 되면 미생물에 의해 분비되는 각종 물질에 의해 산도변화, 독성물질 축적 등이 일어나 미생물의 생육은 중단된다.

미생물 배양과정은 배지멸균, 종균접종, 배양, 배양액 회수 등의 일련의 과정을 거쳐 진행된다.

 

7-2-4-1 배지멸균

배지 및 사용용기를 121℃, 15~30분간 증기 가열하여 잡균을 완전히 살균하는 것이다. 멸균 후 잡균이 들어가 오염 발생이 일어나지 않도록 유지하는 것도 매우 중요하다. 

 

7-2-4-2 종균접종

배양조에 종균을 접종할 때는 멸균된 주사기에 종균을 넣어가지고 배양조의 종균 접종구를 통해 배양하고자 하는 미생물을 주입한다. 이때 접종구 주위 및 주사바늘을 화염으로 살균하여 접종에 의한 오염을 방지한다.

 

7-2-4-3 배양

대량증식을 위해서는 그림과 같은 구조를 가지고 있는 미생물 배양조나 미생물 배양기를 이용한다.

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배양기 incubator는 미생물 배양에 사용되는 기본장비 입니다. 

배양접시(페트리 디쉬), 병, 플라스크, 시험관 등을 이용하는 각종 배양이 이루어지기 때문입니다. 

배양조 fermentor는 미생물의 생육을 정밀하게 제어하여 배양할 때 사용됩니다. 

장비의 구조가 복잡하고 자체적으로 배양조건을 조절할 수 있습니다. 

미생물을 산업용으로 대량 배양할 때 사용하는 방법이 되기도 합니다.

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7-2-4-3-1 배양기 배양  

배양기를 이용한 배양은 <그림 1>과 같다. <그림>의 배양기에서 증식되고 있는 미생물은 홍색을 나타내는 광합성 세균이다.

 

<그림 1> 미생물&nbsp; 배양기(Incubator)

 

 

멸균이 가능한 비닐백에 광합성세균용 배지를 넣어 멸균 한 후 상온으로 식힌다. 충분히 냉각되면 비닐백에 꼭지처럼 보이는 접종구를 통해 종균인 광합성세균을 무균적으로 주입한다. 일련의 과정을 무균상 혹은 무균실에서 하면 편리하다.

 

접종이 끝나면 광합성세균의 생육 적정온도로 설정된 배양기에 넣어 일정기간 배양한다. 광합성세균은 공기가 필요 없는 혐기적인 상태에서 자라고 산도조절도 필요 없으므로, 종균이 접종된 비닐 봉투를 그대로 배양기에 넣고 배양하면 된다. 광합성세균의 배양이 완료되면 붉은색으로 변하게 되므로 쉽게 배양상태를 확인 할 수 있다.

 

7-2-4-3-2 배양조 배양

자동 조절장치가 부착된 미생물 배양조<그림 2>는 작동 매뉴얼에 따라 사용한다.

 

<그림 2> 미생물 배양조(Fermentor)

 

 

<그림 2>의 1은 공기농도, 산도값, 이산화탄소농도, 온도 등을 제어하는 계기판가 배양상태를 나타내는 표시창이다.

<그림 2>의 2는 일정량의 공기를 주입할 수 있게 하는 공기조절기이다. 미생물배양조에 사용되는 공기는 오염이 제거된 순수한 공기를 사용한다.

<그림 2>의 3은 미생물 배양용 배지를 넣어 멸균하여 냉각시킨 후 종균을 접종하여 미생물을 증식시키는 배양조이다. 배양조안에는 온도를 조절하는 장치가 설치되어있어 배양시 온도를 제어할 수 있다.

<그림 2>의 4는 산도를 조절할 때 사용하는 용액을 담아 놓은 용기이다. 미생물이 증식하면 배양액의 상도가 변한다. 산도가 변하면 미생물 생육이 저해되므로 최초 설정된 적정치로 유지되어야 한다. 적정치 산도를 6.5로 하여 배양한 후 배양액의 산도가 6.5이하로 낮아지면 알칼리성 용액이, 높아지면 산성 용액이 주입되어 설정 값을 유지하게 된다. 즉 산도 조정용 용액이 배양조 안으로 자동적으로 주입되어 설정한 범위를 유지하여 미생물배양 최적 상태가 되게 한다.

 

7-2-4-4 배양액 회수 및 균체 농축

배양이 완료되면, 배양조는 배양액 회수 노즐을 통해 수집용기에 배양액을 받는다. 배양기인 경우에는 배양에 사용된 용기에 부착된 마개를 열어 회수용기에 받는다. 배양액에서 균체만 따로 수거하고자 하는 경우에는 배양액을 원심분리기에 넣어 가라앉는 부분만 별도로 회수한다.

배양액 회수 및 균체농축 과정에서 오염방지가 필요한 경우에는 외부로부터의 오염을 방지할 수 있는 무균실이나 무균상 등에서 배양액 및 균체 회수작업을 수행한다.

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미생물 간이 배양-생균제